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生物发光是一种在生物体内由酶将化学能转化为光能的现象,在自然界中有超过30种生物发光体系,而我们所熟知的萤火虫的发光体系就是其中研究最早,应用也最广泛的一种。萤火虫的发光现象是由其体内的萤光素酶(luciferase)的催化下三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)与发光底物萤光素(lucierin)发生反应产生光。
1885年萤光素及萤光素酶第①次被Dubois提取出来;1952年Strehler和Totter首次使用萤光素酶粗制品测定ATP;1961年White等人工合成了萤光素;1985年Dewet, JR等首次克隆了P. Pyralis萤光素酶基因并在大肠杆菌中表达,从中得到具有活性的萤光素酶,从而开启了萤光素酶作为报告基因的历程。
通过监测ATP含量的改变,可以评价多种药物、生物制剂或生物活性物质引起的细胞杀伤、细胞抑制和细胞增殖作用;另外ATP也常作为微生物污染的一个指标,检测ATP含量能直接反映出其受污染程度。测定生物体中ATP的水平及其动态变化便成为监测生物体必不可少的手段。接下来,小编将向大家具体介绍一下他在近年来的应用领域。
人类的身体健康、生命安全长期受到微生物污染的威胁,营养琼脂平板计数法是国际上针对微生物检测的现有标准方法,然而该方法要求在 37 ℃下持续培养 48 h,过于繁琐的操作无法实现快速检测。现下,国内也加大了对核酸法、电阻抗测量、免疫学方法、微菌落技术等各类微生物快速检测技术展开了研究、应用。ATP生物发光法因快速、简便且具有较高灵敏度的缘故,可用于实时监控微生物污染,与食品行业需求相符合,故而有关该技术的研究与应用十分广泛。
②提取样品细胞中的ATP,稀释,之后按比例与酶、底物、缓冲液混合,使用发光检测设备测定发光值,代入标准曲线,即可知道样品中ATP浓度。(ATP浓度与细胞浓度关系的测定:取对数生长期的细胞,离心浓缩后用苔盼蓝染色,计活细胞数,之后在 96孔培养板上等比稀释,测定其发光值,发光值代入标准曲线获得ATP浓度,经过计算即可获得ATP浓度与细胞浓度关系。)
高灵敏度板式发光检测仪Lux-P110:目前已被多家学校、医院、企业所使用,具有极高的灵敏度(≤10amolATP或≤20zmol 萤光素酶)、超宽的线个数量级),同时配备了两个原位进样器,支持双萤光素酶报告体系的检测。
高灵敏度管式发光检测仪Lux-T020:管式发光检测仪主要针对单样品发光检测的客户,相比于Lux-P110,体积更加小巧,使用更加方便,灵敏度则与Lux-110相同。该系列设备支持试用,欢迎您与我们联系。
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