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  • 跑出完美电泳图一套搞定!

  • 发布时间:2024-09-20 10:44:19 来源:爱游戏登录入口 作者:爱游戏大厅app下载

      核酸电泳是进行核酸研究的重要手段,是分离、鉴定和纯化核酸的主要方法。核酸电泳一般有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖作为支持介质的一种电泳方法,常用于DNA切胶回收,DNA分离和用于佐证DNA是否重组、质粒是否切开等等,因其分离范围较广,在实验室中应用广泛。

      电泳缓冲液是核酸凝胶电泳系统的一个重要组成,主要作用是维持合适的pH,使溶液两极的pH保持基本不变。且具有一定的导电性,利于核酸分子从负极迁移到正极。其成分及其离子强度影响物质的电泳迁移率,内含的EDTA可螯合Mg2+等二价阳离子,防止电泳时激活DNA酶及Mg2+与核酸生成沉淀,保护样本的理化性质不变。

      核酸电泳缓冲液分为TAE缓冲液、TEB缓冲液、TPE缓冲液,因为双链线状DNA在TAE的迁移率较其他两种缓冲液更快,因此实验室多使用TAE电泳缓冲液。

      琼脂糖是纯化的线性半乳聚糖亲水胶体,提取自琼脂或者含琼脂的海藻。琼脂糖的基本参数包括:硫酸盐含量、凝胶强度、胶凝点、电内渗(EEO)等。合适的琼脂糖是核酸电泳跑出好胶的重要前提,胶孔清晰、胶体不易断,具备纯度高(硫酸盐含量低)、凝胶强度大、胶凝点相对高(常温条件下凝固快)、电内渗低等特点,是实验室DNA/RNA凝胶电泳的最佳选择。

      琼脂糖凝胶电泳必然离不开核酸染料的加持,核酸染料一般是芳香环化合物,这些化合物能够与DNA中的核苷酸发生静电作用,从而将核酸染料吸附到DNA分子表面。分子中含有的环结构可以吸收紫外线或蓝光,并发出荧光。翌圣核酸染料YeaRed/YeaGreen是油性大分子产品,不能穿透细胞膜进入细胞内,不易挥发升华,不会吸入,经过艾姆斯氏和相关测试表明这两种染料无明显诱变性,是集高灵敏、低毒性和超稳定于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。

      DNA Marker是分子量不同的DNA片段的组合,主要用途为DNA分子凝胶电泳时,与样品共同加入凝胶中进行电泳分离,通过样品条带与DNA Marker对应条带大小及亮度的对比,可以粗略估算样品DNA分子量的大小以及在溶液中的浓度。

      目前翌圣生物DNA Marker分子量大小范围覆盖了从50 bp到15 kb的DNA片段,符合绝大多数实验需求。Marker上样量通常为5-10 μL,如果大分子条带弯曲、拖尾且分不开,可以将Marker原液2 µL稀释5倍加10 µL,条带清晰不拖尾。


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