Rho激酶(ROCKi) 是目前唯一可用于直接靶向和改善传统流出功能的青光眼药物，但由于Rho相关蛋白激酶（ROCK）在多种细胞过程中其抗纤维化作用的机制复杂多样，所以针对不同组织和病理状态的特异性研究，对于评估ROCKi作为抗纤维化药物的疗效极为重要。

　　本研究中，我们将探讨奈塔舒地尔NT在治疗类固醇诱导OHT中的恢复和抗纤维化机制，主要为了鉴定ROCKi 能否降低对传统药物治疗无效的类固醇诱发青光眼患者的高眼压症（OHT，即眼内压升高[IOP]）。

　　实验最终的目的是为了揭示rho激酶在免疫特权环境下，能够预防或减轻糖皮质激素诱导的高眼压症引发的纤维化疾病进程，进一步的确认rho激酶对于无法被传统药物有效控制眼压的患者有着潜在的临床疗效。

　　我们确信，局部给药 ROCKi NT 可以降低对传统药物治疗无效的类固醇诱发青光眼患者的眼压，并且有望对患有类固醇引起高眼压的患者，提供新的临床治疗策略。

　　本研究中，我们使用3至6个月龄的C57BL/6（C57）小鼠，雌雄各半，保存在21°C的饲养室，光照定为黑暗周期为12小时，通过注射含有地塞米松的NP（DEX-NP）到结膜下或眼周间隙来诱导小鼠的眼球高压（OHT），将DEX-NP在PBS中稀释至最终浓度50 μg/μl，涡旋10分钟后超声处理10分钟，用100 mg/10 mg/kg/甲苯噻嗪小鼠。

　　拔出针后，把新霉素和硫酸多粘菌素B抗生素软膏涂抹在眼睛上，并将小鼠置于温热垫上恢复，每周1-2次，持续3-4周，在逆转研究的最后4天，每天一次将DEX眼药膏涂抹于双眼。

　　在上午10点至下午1点之间，小鼠处于轻度睡眠状态时使用回弹眼压计测量眼压，每次测量6次并取平均值。

　　每周使用iPerfusion系统测量小鼠眼压两次，在4周的NT/PL治疗结束后，使用异氟醚实施安乐死，去核小鼠眼球，然后将眼球装入位于灌注室中心的稳定平台。

　　随后注入预热的杜氏磷酸盐缓冲盐水和5.5 mM D-葡萄糖（DBG）至灌注室中，浸没眼球并将温度调至35°C，使用两个玻璃微针连接的系统，微针后部充满过滤后的DBG。

　　再用微型机械手将一根微针分别插入配对眼睛的前房，但不接触虹膜，两只眼睛在9 mmHg下灌注30分钟以适应和稳定，然后在4.5、6、7.5、9、10.5、12、15、18和21 mmHg的九个压力步骤下进行灌注。

　　根据既定标准剔除了质量较差的步骤和后续压力步骤，每个压力步骤4分钟内的平均稳定流速（Q）和压力（P）用于数据分析，以便我们计算流出设施。

　　基于之前在类固醇性青光眼研究中观察到小梁网（TM）的变化，我们测试了奈塔舒地尔（NT）在对传统一线治疗反应不佳的类固醇引起的眼压升高患者中的降压效果。

　　通过回顾性审查患者记录，从三个治疗中心筛选受试者构建两个队列，第一个队列通过对杜克眼科中心电子病历的无偏见回顾性搜索而建立，在该搜索中，鉴定出19名患者（平均年龄66.8岁）的21只眼睛曾因多种眼部疾病接受过糖皮质激素（GC）治疗，进而发展为高眼压症。

　　而治疗后平均眼压降至16.4 ± 4.9 mmHg，处于正常范围内，其中不容忽视的是，在治疗的第一个月内，患者未减少类固醇使用剂量，因此眼压下降不可能是由于停用类固醇引起，针对第二组患者，由经验丰富的青光眼专家回顾病历，包括单次诊断为类固醇诱发青光眼，都未能通过传统治疗控制病情的患者。

　　我们从8名患者中选择了11只眼睛，患者平均年龄为58.4岁，治疗前眼压与第一组相似，为26.5 ± 7.7 mmHg，NT同样显著降低第二组患者眼压，平均降低7.0 mmHg（p=0.0003），使眼压降至19.5 ± 5.8 mmHg。

　　TM 是传统流出途径中的关键组织，GC 治疗显示其机械刚度增加，与流出设施呈负相关，我们之前表明，GC 治疗降低了施累姆氏管 (SC) 管腔在眼压升高时塌陷的趋势，这种效应似乎是由 TM 硬度的变化介导的。

　　由于 NT 等 ROCKi 会降低细胞收缩力并充当抗纤维化药物，我们假设 NT 会逆转类固醇引起的传统流出组织僵硬，并在眼压升高时导致更多 SC 塌陷，为了检验这个假设，我们使用了上面的逆转方案。

　　最后一次 NT/PL 治疗后第 5 天，将小鼠并固定在定制成像平台上，用连接到储液器的单针对 NT 或 PL 治疗的眼睛的前房进行插管，从而控制 IOP。

　　使用光学相干断层扫描 (OCT) 对传统流出组织进行成像时，眼压被钳制在五个不同的水平，随着眼压的增加，NT 和 PL 治疗眼的 SC 管腔变小，但程度不同。

　　在 PL 治疗的眼睛中，SC 管腔在 IOP 为 20 mmHg 时仍然开放，而在 NT 治疗的眼睛中 SC管腔几乎完全塌陷，事实上，在每个压力水平下，NT治疗组和PL治疗组之间的SC管腔横截面积存在显着差异。

　　接下来，我们基于体内获取的 OCT 图像，使用逆有限元建模 (iFEM)量化了 NT 对 TM 刚度的影响，这种 iFEM 程序使我们能够根据 SC 塌陷和相关 TM 变形的结构分析来推断 TM 刚度，该程序是对 NT 和 PL 处理组的 OCT 图像进行的。

　　我们推断 NT 治疗组的 TM 组织硬度值为 22 kPa，而 PL 治疗组的 TM 组织硬度值为后一个值，与我们之前在 DEX-NP 治疗的眼睛中测量的 69 kPa 的 TM 刚度一致。

　　值得注意的是，我们在 NT 治疗眼中估计的 TM 硬度接近于我们之前在幼眼中确定的 29 kPa 值，对于因长期 GC 给药而导致高血压的眼睛，仅给药 4 天。